显微镜专业生产商,上光仪器有限公司(原上海光学仪器厂)

全国统一服务热线 :

技术支持

倒置荧光显微镜及其主要应用领域

      技术支持

? ? ? ?倒置显微镜具有在培养瓶或培养皿内进行显微观察的特点,可以观察不经染色的透明活体 ; 落射荧光显微适用于荧光显微术。该仪器特别适用于对活体细胞和组织、流质、沉淀物等进行显微研究,是生物学,细胞学,肿瘤学,遗传学,免疫学等研究工作的理想仪器。可供科研、高校、医疗、防疫和农牧等部门使用。倒置荧光显微镜是由倒置显微镜和落射荧光显微镜组成。仪器配有长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜、双目观察,倒置显微镜还配有特长或超长工作距离聚光镜,同时配有相衬装置及长工作距离平场相衬物镜。

? ? ? ?倒置荧光显微镜是近代发展起来的新式荧光显微镜,特点是激发光从物镜向下落射到标本表面,即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器,它与光铀呈45。角,激发光被反射到物镜中,并聚集在样品上,样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜,反回到双色束分离器,使激发光和荧光分开,残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片/双色束分离器/阻断滤片的组合插块,可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀,成像清晰,放大倍数愈大荧光愈强。

? ? ? ?倒置荧光显微镜由荧光附件与倒置显微镜有机结合构成的,主要用于细胞等活体组织的荧光、相差观察。 倒置显微镜(Inverted microscope)是为了适应生物学、医学等领域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护、食品检验等显微观察。由于这些活体被检物体均放置在培养皿(或培养瓶)中,这样就要求倒置显微镜的物镜和聚光镜的工作距离很长,能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。因此,物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来,故称为”倒置显微镜”。倒置显微镜多用于无色透明的活体观察,在倒置显微镜的基础上添加一套荧光附件:激光激发块,荧光光源,荧光照明器,激发块切换装置,即可进行倒置荧光观察。

一、荧光显微镜标本制作要求

1.载玻片

? ? ? ?载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间,太厚的坡片,一方面光吸收多,另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁,厚度均匀,无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。

2.盖玻片

? ? ? ?盖玻片厚度在0.17mm左右,光洁。为了加强激发光,也可用干涩盖玻片,这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起不同干涉作用的物质(如氟化镁)的盖玻片,它可以使荧光顺利通过,而反射激发光,这种反射的激发光可激发标本。

3.标本

? ? ? ?组织切片或其他标本不能太厚,如太厚激发光大部分消耗在标本下部,而物镜直接观察到的上部不能被充分激发。另外,细胞重叠或杂质掩盖,影响判断。

4.封裱剂

? ? ? ?封裱剂常用甘油,必须无自发荧光,无色透明,荧光的亮度在PH8.5~9.5时较亮,不易很快褪去。所以,常用甘油和0.5mol/L PH9.0~9.5的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封裱剂。

5.镜油

? ? ? ?一般用暗视野荧光显微镜和油镜观察标本时,必须使用镜油。最好使用特制的无荧光镜油,也可用上述甘油代替,液体石蜡也可用,只是折光率较低,对图像质量略有影响。

二、荧光显微镜基本操作

? ?1.关闭房间内的电灯,开启显微镜汞灯;

? ?2.根据样品标记的荧光素选择相应的滤光片;

? ?3.放好样品,找到合适的视野;

? ?4.如需拍照,请确认照相机内已装好彩色胶卷(最好使用27定胶卷);

? ?5.开启自拍装置,选择手动档,通常拍摄速度在0.5-10秒内;

? ?6.使用结束,关闭所有电源并做好使用记录。

三、荧光图像的记录方法

? ? ? ?荧光显微镜所看到的荧光图像,一是具有形态学特征,二是具有荧光的颜色和亮度,在判断结果时,必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标,即凭工作者目力观察。作为一般定性观察,基本上可靠的。随着技术科学的发展,在不同程度上采用客观指标记录判断结果,如用细胞分光光度计,图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果,也必须结合主观的判断。

? ? ? ?荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要,由于荧光很易褪色减弱,要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。只是需要采用高速感光胶片即可。因紫外光对荧光猝灭作用大,如FITC的标记物,在紫外光下照射30s,荧光亮度降低50%。所以,曝光速度太慢,就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。

四、使用荧光显微镜的注意事项

? ?1.严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作,不要随意改变程序。

? ?2.应在暗室中进行检查。进入暗室后,接上电源,点燃超高压汞灯5~15min,待光源发出强光稳定后,眼睛完全适应暗室,再开始观察标本。

? ?3.防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜。

? ?4.检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱;所以,最多不得超过2~3h。

? ?5.荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时,须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。

? ?6.标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发。

? ?7.荧光亮度的判断标准:一般分为四级,即“-”指无或可见微弱荧光。“+”指仅能见明确可见的荧光。“++”指可见有明亮的荧光。“+++”指可见耀眼的荧光。

?

久久爱生产